Il-kromatografija likwida ta 'prestazzjoni għolja tinkludi prinċipalment sistema ta' injezzjoni, sistema ta 'infużjoni, sistema ta' separazzjoni, sistema ta 'skoperta u sistema ta' pproċessar tad-dejta. Dawn li ġejjin se jintroduċu l-kompożizzjonijiet u l-karatteristiċi rispettivi tagħhom.
1. Is-sistema ta 'injezzjoni ġeneralment tuża injettur tad-dijaframma jew kamra ta' injezzjoni bi pressjoni għolja biex tlesti l-operazzjoni ta 'injezzjoni, b'volum ta' injezzjoni kostanti. Dan huwa ta 'benefiċċju għat-titjib tar-riproduċibbiltà tal-analiżi tal-kampjun.
2. Is-sistema ta 'infużjoni tikkonsisti fi tliet partijiet: pompa ta' pressjoni għolja, ġibjun tal-fażi mobbli, u miter tal-gradjent. Il-pressjoni ġenerali ta 'pompa ta' pressjoni għolja hija l. 47-4.4X107Pa, rata tal-fluss aġġustabbli u stabbli. Meta l-fażi mobbli bi pressjoni għolja tgħaddi mill-kolonna kromatografika, tista 'tnaqqas l-effett tad-diffużjoni tal-kampjun ġewwa l-kolonna, taċċellera l-veloċità tal-moviment ġewwa l-kolonna, ittejjeb il-grad ta' separazzjoni, u tirkupra l-kampjun. Benefiċċju għaż-żamma tal-attività bijoloġika tal-kampjun. L-iżball tal-ħażna tal-fażi mobbli u l-analizzatur tal-gradjent jistgħu jibdlu l-fażi mobbli skont il-proprjetajiet tal-fażi stazzjonarja u l-kampjun, inkluż it-tibdil tal-polarità, is-saħħa tal-jone u l-valur tal-pH tal-eluwent, jew bl-użu ta 'inibituri kompetittivi jew aġenti denaturanti. Dan jippermetti s-separazzjoni effettiva ta' sustanzi multipli, anki jekk hemm sett wieħed biss ta' differenzi jew isomeri.
3. Is-sistema ta 'separazzjoni tinkludi kolonni tal-kromatografija, tubi li jgħaqqdu, termostats, eċċ. It-tul tal-kolonna kromatografika huwa ġeneralment 10-50 ċm (jekk ikunu meħtieġa tnejn, jista' jiżdied tubu ta 'konnessjoni bejniethom), b'dijametru ta' ġewwa ta' 2-5mm, magħmul minn azzar li ma jissaddadx ta' kwalità għolja jew tubu tal-ħġieġ b'ħitan ħoxnin jew liga tat-titanju. Hemm fażi fissa b'daqs tal-partiċella ta' 5-10 μ m (magħmula minn matriċi u fissattiv). Il-matriċi fil-fażi stazzjonarja hija magħmula minn reżina ta 'saħħa mekkanika għolja jew ġel tas-silika, li għandhom inertness (bħal ġel tas-silika alkalina tneħħa), porożità (daqs tal-pori sa 1000?), u erja tal-wiċċ speċifika kbira. Huma miksija mekkanikament għall-akkoppjar (simili għall-preparazzjoni ta 'fażijiet stazzjonarji tal-kromatografija tal-gass), jew akkoppjati kimikament ma' diversi ġeni (bħal fosfat, amino kwaternarju, idrossimetil, fenil, amino, jew tulijiet varji ta 'alkil tal-katina tal-karbonju) jew komposti organiċi ligand . Allura, din l-istruttura relattiva fissa għandha selettività tajba. Pereżempju, wara l-akkoppjar tal-agglutinin tal-piżelli (PSA) fuq il-wiċċ tal-ġel tas-silika poruż, il-glikoproteini fil-fibroblasti jistgħu jiġu iżolati. Barra minn hekk, il-plasmid ibbażat fuq il-fażi stazzjonarja huwa żgħir u s-sodda tal-kolonna hija faċli biex tikseb stat uniformi u dens. Huwa faċli li jitnaqqas l-effett tad-diffużjoni tal-kurrent eddy. Id-daqs tal-partiċelli tal-matriċi huwa żgħir, il-mikropori huma baxxi, u t-trasferiment tal-massa tal-kampjun fiż-żona mikroporuża huwa qasir. Dawn huma ta 'benefiċċju għat-tnaqqis tal-bandwidth u t-titjib tar-riżoluzzjoni. Skont l-analiżi tat-teorija tal-effett tal-kolonna, iżgħar ikun id-daqs tal-partiċelli tal-matriċi u akbar ikun in-numru teoretiku N tal-pjanċa. Dan ikompli jipprova li iktar ma jkun żgħir id-daqs tal-partiċelli tal-matriċi, iktar ikun għoli l-grad ta 'separazzjoni. Barra minn hekk, termostati ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja jistgħu jaġġustaw it-temperatura mit-temperatura tal-kamra għal 60 grad, u jqassru l-ħin tal-analiżi billi jżidu r-rata ta 'trasferiment tal-massa., Jista' jtejjeb l-effiċjenza tal-kolonna kromatografika.
4. L-intraċċar użat komunement għal sistemi ta 'skoperta HPLC jinkludu ditekters ultravjola, ditekters ta' indiċi rifrattiv, u ditekters fluworexxenti.
(1) Id-ditekter UV huwa adattat biex jiskopri kampjuni b'karatteristiċi ta 'assorbiment taħt dawl ultravjola (jew viżibbli). Il-karatteristiċi tiegħu: firxa wiesgħa ta 'applikazzjoni (bħal proteini, aċidi nuklejċi, aċidi amminiċi, nukleotidi, peptidi, ormoni, eċċ.); Sensittività għolja (limitu ta' skoperta ta' 10-10g/ml); Firxa lineari wiesgħa; Mhux sensittiv għat-temperatura u l-bidliet fir-rata tal-fluss; Jista 'jiskopri kampjuni elużi b'soluzzjonijiet gradjent.
(2) Detector ta 'indiċi ta' rifrazzjoni differenzjali jista 'jintuża biex jiskopri l-komponenti kollha tal-kampjun b'indiċi ta' rifrazzjoni differenti minn dawk misjuba minn ditekter tal-fażi mobbli. Fil-preżent, il-biċċa l-kbira tal-komposti tal-karboidrati huma skoperti bl-użu ta 'din is-sistema ta' skoperta. Is-sistema għandha universalità qawwija u tħaddim sempliċi, iżda sensittività baxxa (limitu ta 'skoperta ta' 10-7g/ml), u bidliet fil-fażi mobbli jistgħu jikkawżaw bidliet fl-indiċi refrattiv. Għalhekk, la huwa adattat għall-analiżi tat-traċċi u lanqas għall-iskoperta ta 'kampjuni ta' elużjoni tal-gradjent.
(3) Id-ditekter tal-fluworexxenza huwa adattat biss għad-determinazzjoni ta 'komposti organiċi fluworexxenti (bħal idrokarburi aromatiċi poliċikliċi, aċidi amminiċi, amini, vitamini, u ċerti proteini) taħt ċerti kundizzjonijiet, ibbażati fuq l-intensità tal-fluworexxenza u l-konċentrazzjoni tad-dawl emess. Is-sensittività tagħha hija għolja ħafna (il-limitu ta 'skoperta huwa 10-12~10-14g/ml), u jista' jintuża għall-analiżi tat-traċċi u l-iskoperta fix-xogħol ta 'eluzzjoni tal-gradjent.
5. Is-sistema tal-ipproċessar tad-dejta tista 'tiġbor, taħżen, turi, tipprintja u tipproċessa d-dejta tat-test biex tissepara kampjuni, u tista' twettaq b'mod korrett xogħol ta 'preparazzjoni jew identifikazzjoni